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液相色譜柱的結構及使用方法說明
發布者:     發布于:2018/04/08    瀏覽量:769

在選擇色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質,他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等,1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受純水且對極性化合物保留很好的色譜柱2.如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)3.若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質,且硅膠端基封尾)或一些經過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留4.如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優點是方法開發簡單,缺點是目前實現這一技術的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。色譜柱是運用于色譜儀系統中起著分離作用的儀器,是色譜儀分析系統的核心部件,色譜柱柱效的高低影響著檢測速率的快慢以及檢測結果的準確性。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快。色譜柱的性質(粒度、粒徑分布等)、填充料、柱長、固定相和流動相的種類等都是影響色譜柱柱效的因素。因此,為了提高色譜柱的柱效,保證液相色譜儀分析檢測的靈敏性,了解液相色譜柱的結構性能尤為重要。色譜柱空柱是由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。柱接頭是兩端螺紋組件,采用低死體積結構,一端是7/16英寸外螺紋,另一端是3/16英寸的內螺紋(國內外已規范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓環用于密封。3/16英寸的內螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,提高色譜柱柱效。在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失??罩髯榧?16#不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,液相色譜柱的分類是依據填料類型而定。正相柱:多以硅膠為柱填料。根據外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10μm的范圍內。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。反相柱:主要是以硅膠為基質,在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3—10μm之間。正相色譜柱的使用方法1.新柱子可直接用流動相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再根據流動相選用極性相近的氯或二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積,換成流動相;2.正相使用時,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動相要脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物(質量不好的億醚、四氫呋喃含有少量);3.任何時候更換流動相時都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶。反相色譜柱的使用方法1.先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子;2.以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動相;3.配制流動相時,應各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調pH值時要精密到0.1;4.反相條件下使用時,要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發生水解的危險,流動相中水的比例越高當然也越有發生水解的危險。理想的pH范圍在pH3.0-7.0;5.如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內的析出


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